Percoll分離液是一種經(jīng)過聚乙烯吡咯烷酮處理過的硅膠顆粒，經(jīng)過高速離心后可形成連續(xù)密度梯度，由于Percoll擴(kuò)散常數(shù)低，所形成的梯度十分穩(wěn)定。Percoll分離液采用預(yù)先形成的密度梯度時可在低離心力(200～1000g)于數(shù)分至數(shù)十分鐘內(nèi)達(dá)到滿意的細(xì)胞分離結(jié)果。此外，Percoll分離液不穿透生物膜，對細(xì)胞無毒害，因此廣泛用于分離細(xì)胞、亞細(xì)胞成分、細(xì)菌及病毒，還可將受損細(xì)胞及其碎片與完好的活細(xì)胞分離。Percoll常用于分離和傳話植物原生質(zhì)體、核、葉綠體、和線粒體。
 
Percoll分離液的配置與使用：
1、不同濃度(密度)Percoll分離液的制備：先用9份Percoll分離液與1份8.5％ NaCl或1.5MPBS混合達(dá)到生理性滲透壓，然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀釋到所需濃度。
2、不連續(xù)密度梯度Percoll層的制備：先將試管壁用牛血清濕潤，除去多余血清，這種預(yù)處理可使逐層疊加的Percoll液平穩(wěn)沿管壁流下，使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置，有時相鄰兩層Percoll比重相差不大時，可將Percoll液放入注射器中，小針頭斜面緊貼管壁，任其自然慢慢流下。
3、裝樣：樣品體積和細(xì)胞濃度根據(jù)不同細(xì)胞而異，一般加樣體積不宜過大，細(xì)胞濃度也不可過高，否則會影響細(xì)胞的分離和回收。
4、離心：一般采用離心力為400g，時間20～25min。由于多層Percoll之間密度差別不大，因此離心機(jī)加速、降速時要慢，要平穩(wěn)。
5、取樣：當(dāng)所要分離的細(xì)胞絕大部分在兩層的界面時，可逐層去除Percoll液后收集界面部位的細(xì)胞；有時大部分細(xì)胞位于Percoll層中，則需要逐層收集。收獲含有Percoll液的細(xì)胞經(jīng)2次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測用。
 
Percoll細(xì)胞分離液的優(yōu)點：
Percoll滲透性低、不穿透細(xì)胞、密度高、無毒害，是目前較理想的介質(zhì)。Percoll密度梯度離心已被多次成功地用于動物細(xì)胞及其細(xì)胞器的分離，純化了包括人血液細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、紅血球細(xì)胞、白血球細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、肝細(xì)胞等在內(nèi)的十余種動物細(xì)胞。
 
Percoll細(xì)胞分離液注意事項：
1、Percoll細(xì)胞分離液在儲存及孵育過程中避免將實際保留在強(qiáng)光中。
2、試劑瓶蓋需蓋緊，防止蒸發(fā)和污染。
 
素材來源于網(wǎng)絡(luò)。
想了解更多生化試劑知識，敬請關(guān)注“匯百試劑”官方網(wǎng)站：http://m.akprotocol.com
(本網(wǎng)站所有內(nèi)容，凡注明來源為“匯百試劑”，版權(quán)均歸匯百試劑所有，未經(jīng)授權(quán)，任何媒體、網(wǎng)站或個人不得轉(zhuǎn)載，否則將追究法律責(zé)任，授權(quán)轉(zhuǎn)載時須注明“來源：匯百試劑”。本網(wǎng)注明來源為其他媒體的內(nèi)容為轉(zhuǎn)載，轉(zhuǎn)載僅作觀點分享，版權(quán)歸原作者所有，如有侵犯版權(quán)，請及時聯(lián)系我們。)